核心原则： 细心、规范、安全。每一次成功、可重复的分析都始于严格遵循操作规程。

一、 开机前准备

    流动相准备：

    纯度： 使用 HPLC 或更高纯度的溶剂。水必须为新鲜制备的超纯水（电阻率 ≥18.2 MΩ·cm）。

    过滤： 所有流动相必须用 0.45 μm 或 0.22 μm 的微孔滤膜进行真空抽滤，以除去颗粒杂质，防止堵塞系统和色谱柱。

    脱气： 必须充分脱气，以消除气泡（可能导致泵压力不稳、基线噪音、峰形异常）。推荐使用在线脱气机，或采用超声脱气（20-30分钟）。

    兼容性： 确保流动相各组分互溶，且与仪器管路、密封垫、色谱柱填料兼容（如避免使用高氯酸盐对不锈钢系统的腐蚀）。

 样品准备：

    溶解： 样品应完全溶解在适当的溶剂中，最好与初始流动相组成相近，以避免溶剂效应导致峰变形。

    净化： 复杂样品（如生物样品、提取物）需进行预处理（离心、过滤、萃取），并使用 0.22 μm 针头式过滤器过滤，防止堵塞进样器和色谱柱。

    稳定性： 确保样品在分析条件下稳定。

系统检查：

    检查溶剂瓶： 各通道的溶剂是否足量，入口过滤器是否完全浸没。

    检查废液瓶： 及时清空，防止废液溢出。

    检查色谱柱： 确认安装的色谱柱类型与分析方法匹配，柱温箱设置是否正确。

    检查管路： 确认各连接处无泄漏。

 二、 开机与平衡

正确开机顺序： 先打开工作站电脑、检测器（如UV），再打开泵、自动进样器、柱温箱等模块电源。让系统自检通过。

启动流速要缓慢： 特别是更换新色谱柱或使用高粘度流动相时，应从低流速（如 0.1-0.5 mL/min）开始，逐步升至方法流速，避免压力冲击损坏色谱柱填料。

 充分平衡系统： 这是获得稳定基线的关键。

    用初始比例流动相以方法流速冲洗系统，直至压力稳定（波动 <1%）。

    对于反相色谱，通常需要至少用10-15倍柱体积的流动相进行平衡。梯度方法需要更长时间。

    观察基线，待其平稳、噪音水平达到预期后再开始进样。

三、 进样与分析

进样器操作：

    使用与进样器匹配的专用平头进样针。

    吸取样品体积应准确，避免引入气泡（可多吸再回推排除）。

    若为手动进样，切换阀动作应迅速且到位，从“Load”到“Inject”位置后立即复位。

    进样前后，用合适的清洗溶剂（如样品溶剂或流动相）充分冲洗进样针和进样口，防止交叉污染。

实时监控：

    压力是关键指标！ 记录方法的正常压力范围。压力异常（过高、过低、剧烈波动）是问题的首要信号。

    压力过高： 可能色谱柱或保护柱堵塞、管路堵塞。

    压力过低： 可能管路泄漏、泵不上液、有气泡。

    观察基线： 注意基线漂移、噪音增加、出现鬼峰等异常情况。

    关注峰形： 峰展宽、分叉、拖尾可能预示色谱柱性能下降或方法问题。

四、 关机与保存

    冲洗系统（最重要步骤！）：

    分析结束后，切勿直接关闭泵。 必须用合适的保存溶剂彻底冲洗整个流路。

    反相色谱（C18等）： 先用高比例水相冲洗（如 水:甲醇 = 90:10，10-15分钟），除去缓冲盐，然后过渡到100%有机相冲洗至少30分钟，以置换出系统内的水，防止微生物生长或盐析。

    正相色谱： 用惰性溶剂（如异丙醇、正己烷）冲洗。

    缓冲盐流动相： 绝对禁止将含缓冲盐的流动相在系统中静置过夜，务必用水置换干净。

色谱柱的保存与拆卸：

    冲洗完毕后，将流速降至零，然后停泵。

    根据色谱柱说明书，用指定的保存溶剂封存色谱柱。

    卸下色谱柱后，两端立即用堵头拧紧，防止保存液挥发干涸。

系统关机：

    关闭检测器灯源（如氘灯），以延长其寿命。

    在软件中执行“关闭系统”或按顺序关闭各模块电源。

    最后关闭电脑及总电源。

五、 日常维护与故障预防

    定期更换部件： 按照厂家建议或使用频率，定期更换泵密封垫、进样器转子密封垫、在线过滤器滤芯、Purge阀过滤白头等易损耗件。

    使用保护柱/预柱： 这是保护昂贵分析柱最经济有效的方法，能截留颗粒和强保留物质，当柱效下降时只需更换保护柱芯。

    专用色谱柱： 对特定项目（如复杂的生物样品、强酸强碱分析）建议使用专用色谱柱，避免交叉污染。

    完整记录： 建立并使用仪器使用日志，记录每次开关机时间、使用者、分析项目、色谱柱、压力、异常情况及维护记录。

六、 安全注意事项

    化学品安全： 在通风橱中配制有毒或挥发性流动相，佩戴防护眼镜、手套和实验服。

    废液处理： 有机溶剂和含缓冲盐的废液需分开收集，交由专业机构处理，不可直接倒入下水道。

    高压风险： HPLC系统在高压下运行，连接或拆卸管路、色谱柱前，务必先停泵并泄压。

    用电安全： 确保仪器接地良好，避免液体溅到电气部件上。

总结口诀：

    流动相，过滤脱气是关键；

    开机时，慢升流速稳基线；

    分析中，紧盯压力与基线；

    关机前，冲洗系统莫偷懒；

    勤维护，记录完整保安全。

    遵循以上注意事项，不仅能获得可靠的分析数据，还能最大限度地延长HPLC系统及色谱柱的使用寿命，降低故障率。

上海甄准生物科技公司秉持科学发展，诚信服务的理念，为各研究室提供最优质的产品。

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